Od AEEA monomera do dimera

Omjer lijeka i protutijela (DAR) ključni je atribut kvalitete lijekova konjugiranih s protutijelima (ADC) koji izravno utječe na učinkovitost i toksičnost. Idealni DAR je obično 2-4, ali mnoga učinkovita korisna opterećenja kao što su MMAE i DM1 imaju jaku hidrofobnost. Kada se koriste kratkolančani ili jednostruki PEG poveznici, DAR veći od 4 dovodi do ubrzane agregacije i uklanjanja antitijela. Uvođenje AEEA-AEEA pruža učinkovito rješenje za ovaj problem.
U usporedbi s jednim AEEA povezivačem,AEEA-AEEAudvostručuje duljinu PEG lanca i ima jaču hidrofilnost. Svaka dimerna jedinica doprinosi 4 eterske veze i 2 amidne veze, koje mogu vezati više molekula vode i formirati gušći hidratacijski sloj. Kada je više hidrofobnih lijekova povezano s površinom antitijela putem AEEA-AEEA, hidratacijski sloj može učinkovito zaštititi hidrofobne interakcije između lijekova i spriječiti agregaciju antitijela. Eksperimentalni podaci pokazuju da ADC konstruirani korištenjem AEEA-AEEA održavaju koloidnu stabilnost (brzina agregacije<5%) even when DAR reaches 6-8, while the control using single AEEA shows significant precipitation when DAR>4.
Strategija regulacije DAR-a odnosi se na prethodno povezivanje AEEA-AEEA s lijekom u tehnologiji spajanja usmjerene na mjesto, a zatim na reakciju s projektiranim cisteinom na antitijelu. Podešavanjem molarnog omjera veznog lijeka i protutijela (obično 3:1 do 10:1), DAR vrijednost može se precizno kontrolirati. Na primjer, 2-struki višak može dati DAR2 produkt, 4-struki višak može dati DAR4, a 8-struki višak može postići DAR6-8. HIC-HPLC ili masena spektrometrija mogu točno odrediti distribuciju DAR. Za indikacije tumora koje zahtijevaju veliko opterećenje, kao što je rak dojke s niskom ekspresijom HER2 i rak malih stanica pluća, AEEA-AEEA omogućuje visoki DAR i značajno poboljšava učinak uništavanja tumora. Pretkliničke studije su pokazale da ADC DAR6 povećava stopu inhibicije tumora za oko 40% u usporedbi s ADC DAR4 pri istoj dozi, bez značajnog povećanja toksičnosti.